¶ ПЦР-буфер: 10X B-буфер (Basic-buffer, щелочной буфер)
B-буфер (Basic-buffer, щелочной буфер) — это специализированная молекулярно-биологическая среда с высоким уровнем pH (обычно от 8.5 до 9.5), разработанная для оптимизации ПЦР-амплификации сложных, длинных или GC-богатых фрагментов ДНК, а также для работы специфических ферментов рестрикции. Сильная щелочная основа раствора эффективно снижает стабильность вторичных структур нуклеиновых кислот (шпилек и петель), облегчая плавление матрицы и обеспечивая беспрепятственное прохождение ДНК-полимеразы по сложным участкам цепи. За счет точно подобранной ионной силы и стабилизирующих компонентов (таких как соли магния и детергенты) буфер поддерживает каталитическую активность термостабильных энзимов в жестких температурных условиях, сводя к минимуму образование неспецифических продуктов реакции.
¶ Калькулятор состава
¶ B-буфер (на основе глицина, 10X)
Назначение:
Специализированный щелочной буфер, используемый в основном для ПЦР с высокопроцессивными полимеразами (proofreading) или при необходимости работы в более высоком диапазоне pH. Глицин в составе выступает в роли цвиттер-ионного буферного агента, который стабилизирует фермент и помогает эффективно денатурировать ДНК.
Ключевые отличия и преимущества:
- Высокий pH: Обычно имеет pH в диапазоне 9.0–9.5, что облегчает расхождение цепей ДНК на матрицах с высоким содержанием GC.
- Стабилизация фермента: Глицин предотвращает агрегацию полимеразы при высоких температурах цикла.
- Совместимость: Часто применяется в паре с Hot-Start полимеразами.
¶ Стерилизация
- Стерилизовать методом фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0.22 мкм.
- Использование автоклавирования не рекомендуется.
¶ Срок годности
- -20°C: 1.5 – 2 года
- +4°C: 4–5 месяцев
- +25°C (комнатная температура): не более 48 часов
¶ Как цитировать
Sleptcov A. Genomicon Lab Recipes: Interactive Protocols and Safety Data for Laboratory Reagent Preparation (v1.1). Zenodo. 2026. DOI: 10.5281/zenodo.19759566. (Accessed: ).
