¶ 🧪 10X Тетраметиламмониевый буфер (TMA-based)
¶ Калькулятор состава
Tween 20, NP-40 (Nonidet P-40) или Triton X-100 взаимозаменяемы в большинстве протоколов ПЦР в том же % соотношении, так как являются неионными детергентами. Их основная роль предотвращение агрегации фермента и его прилипания к стенкам пластика, а также подавление образования вторичных структур ДНК. Можно кобминировать, но без увеличения общего % неионных детергентов.
- Tween 20: Более мягкий. Он лучше подходит для рутинной ПЦР и стабильности фермента при хранении.
- NP-40: Чуть более эффективен при работе со сложными матрицами (GC-богатыми), так как лучше помогает «разваливать» вторичные структуры ДНК.
- Важно: Вместо NP-40 сейчас используют Triton X-100, так как оригинальный NP-40 снят с производства в начале 00х (его заменяет аналог Tergitol Type NP-40). Triton X-100 действует практически идентично NP-40.
В составе отсутствует (добавляется отдельно в зависимости от оптимизации ПЦР).
¶ Тетраметиламмониевый буфер (TMA-based, 10X)
Назначение:
Используется для предельного повышения специфичности ПЦР. Ионы тетраметиламмония () обладают уникальным свойством: они выравнивают температуры плавления () пар оснований A-T и G-C.
Основные преимущества:
- Устранение зависимости от состава: Делает энергию гибридизации праймера зависимой только от его длины, а не от содержания GC-пар.
- Борьба с неспецификой: Эффективен при работе с крайне сложными матрицами и вырожденными праймерами.
- Сложные последовательности: Позволяет амплифицировать участки с сильными вторичными структурами.
Особенности работы:
- Токсичность: TMACl является токсичным веществом.
- Стабильность: Буфер более чувствителен к свету и длительному хранению при комнатной температуре, чем стандартный KCl-буфер.
- Оптимизация: Часто требует более точной подборки концентрации ионов магния ().
Важные примечания:
- Светочувствительность: TMA-хлорид чувствителен к прямому свету, поэтому буфер лучше хранить в непрозрачных аликвотах (янтарный пластик) или обернутым в фольгу.
- Кристаллизация: Если при +4°C выпал осадок, прогрейте пробирку до комнатной температуры и аккуратно перемешайте до полного растворения перед использованием.
- Запах: Появление резкого запаха рыбы (триметиламина) сигнализирует о распаде TMA-компонента — такой буфер использовать нельзя.
¶ Стерилизация
- Стерилизовать методом фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0.22 мкм.
- Использование автоклавирования не рекомендуется.
¶ Срок годности
- -20°C: 12–18 месяцев
- +4°C: 3–4 месяца
- +25°C (комнатная температура): не более 72 часов
¶ Как цитировать
Sleptcov A. Genomicon Lab Recipes: Interactive Protocols and Safety Data for Laboratory Reagent Preparation (v1.1). Zenodo. 2026. DOI: 10.5281/zenodo.19759566. (Accessed: ).
